刺客信条2的背景设定在1486年的意大利文艺复兴时代，地点在威尼斯、佛罗伦萨以及托斯卡纳，玩家依旧是操作戴西蒙德的祖先，本次的祖先名叫艾西欧。Ezio出身贵族，但是没多久他就被卷入了他人对他家族的阴谋中，于是他决定找阴谋策划者复仇。在Ezio的任务中，他将要面对强大的Grimaldi家族，这个家族也就相当于今天黑手党的前身。除了要对抗Grimaldi家族的成员，我们知道圣殿骑士团也会回来。作为敌方重要角色的Carno Grimaldi，在威尼斯当地可谓有权有势。很显然，这个家伙身边保护重重，而他对自己过于自信也是他失败的原因 。新游戏将沿用《刺客信条》的Scimitar（Anvil）引擎，《波斯王子》和《肖恩·怀特滑雪》也同样基于该引擎。《刺客信条2》将引入全新的任务和游戏要素，增加更多种类的武器和道具并借此衍生出更加丰富的玩法。